Medical Centre
Genetic Logo
За последние несколько лет в генетической диагностике появилась новая технология - Секвенирование Нового Поколения (Next Generation Sequencing), которая используется для преимплантационного генетического тестирования на анеуплоидии ПГТ-А (PGT-A), ранее известная как ПГС (PGS) – преимплантационный генетический скрининг). Данная технология позволила выявлять мозаицизм в образцах преимплантационных эмбрионов. Как результат такого прогресса, мозаицизм теперь признан третьей категорией хромосомного статуса эмбрионов, наряду с эуплоидией и анеуплоидией.
эуплодный, мозаичный и анеуплодный эмбрион
Эуплоидный эмбрион (нормальный набор хромосом)Мозаичный эмбрионАнеуплоидный эмбрион (аномальный набор хромосом)

Что такое мозаицизм?

Мозаизм - это наличие двух или более клеточных линий, каждая из которых имеет различный генотип в пределах одного эмбриона, ткани или индивидуума. Эмбрионы с хромосомным мозаицизмом содержат две или более линии клеток с различным количеством хромосом (например, некоторые клетки являются эуплоидными, а другие - анеуплоидными). Эуплоидная и анеуплоидная клетка

Как возникает мозаицизм?

Полная анеуплоидия является результатом ошибок в мейозе, возникающих во время созревания половых клеток (гамет). В основном считается, что частота анеуплоидии увеличивается с возрастом матери. Известно, что мозаицизм является результатом ошибок в митозе, а не в мейозе, которые возникают во время деления клеток в процессе развития эмбриона. Таким образом, показатели мозаицизма, видимо, не зависят от возраста матери. Исследователи связывают возникновения данного нарушения с дефектами структур сперматозоида, которые в будущем эмбрионе формируют аппарат для равноценного распределения хромосом между клетками. Ошибка в митозе приводит к появлению дочерних клеток с другим хромосомным составом

Влияние временного фактора

Распространение мозаицизма эмбрионов связано со временем возникновения митотической ошибки. Если ошибка произойдет в ранней фазе деления клеток, тогда будет затронуто больше клеток, чем если бы это произошло на более позднем этапе. Влияние временного фактора. Митотическая ошибка рисунок 1 Влияние временного фактора. Митотическая ошибка рисунок 2 ПГТ-A обычно проводят на 5-е сутки после оплодотворения яйцеклетки (стадия бластоцисты), биопсию выполняют, когда эмбрион содержит примерно 100-200 клеток. Показанные модели представляют собой эмбрионы со 128 клетками.

Случаи возникновения мозаицизма

Наши данные свидетельствуют о том, что клинические случаи мозаицизма составляют около 10-20%. Однако, многие современные исследования показывают, что случаи возникновения мозаицизма при биопсии эмбриона на стадии бластоцисты выше на 20-30%. Процент мозаицизма выше, так как эти данные включают образцы, диагностированные как мозаичные по одной или по нескольким хромосомам, и анеуплоидные по одной или по нескольким хромосомам. Поскольку эти образцы содержат мейотическую анеуплоидию, они были бы клинически классифицированы как «анеуплоидные», а не «мозаичные». случаи возникновения мозаицизма

Как обнаружить мозаицизм?

Обычно биоптат бластоцисты на 5-е сутки содержит от 5 до 10 клеток. Уровень мозаицизма в биоптате из 5 клеток минимально может составить 20% (1 из 5 клеток), при этом самым высоким показателем может быть 80% (4 из 5 клеток). Однако, Международное общество по преимплантационной диагностике (PGDIS), также как и руководство Европейского общества репродукции и эмбриологии человека по выполнению ПГТ-А, рекомендуют классифицировать результаты ПГТ-A следующим образом: эмбрионы, в которых выявлено менее 20% анеуплоидных клеток относит к категории эуплоидных, при выявлении анеуплоидных клеток в интервале от 20 до 80% расценивать как мозаицизм, а в определением анеуплоидий в более чем80% клетов считать эмбрион анеуплоидным. ПГТ-A с высокой точностью, которое можно выполнить с применением NGS, в настоящее время является единственным подтвержденным методом , для надежного обнаружения мозаицизма в этом диапазоне. Как обнаружить мозаицизм

Мозаицизм эмбриона

Мозаицизм может появляться как во всем эмбрионе, так и быть ограниченным в определенных его участкахВ процессе биопсии бластоцисты проводиться забор клеток трофэктодермы (TE), которая вдальнейшем продолжает формировать плаценту; в то же время внутри клеточная масса (ICM), из которой формируется тело плода, остается нетронутой. Мозаицизм, выявленный в образце трофэктодермы, не всегда указывает на наличие мозаицизма в ICM, что, в свою очередь, не гарантирует появление мозаицизму у плода, но и не гарантирует живорождение.

Мозаицизм в ICM

Мозаицизм во внутриклеточной массе: Мозаичная ICM, Эуплоидная ICM, Анеуплоидная ICM

Мозаицизм в трофэктодерме

Также возможно, что мозаицизм может существовать только в ICM, не затрагивая TE. В таком случае при проведении ПГТ-А Эмбрион с мозаичным ICM, но эуплоидным TE, получит статус эуплоидного, а перенос и имплантация такого эмбриона может привести к неблагоприятному исходу. Поэтому очень важно сохранять обмен информацией между клиницистами и специалистами лабораторий, которые проводят предимплантационное генетическое тестирование, чтобы улучшить точность диагностики, сопоставляя ее с клиническими исходами.

Повторная биопсия мозаичного эмбриона

Так как при биопсии бластоцисты выполняется забор клеток из ТЕ, повторная биопсия эмбриона с выявленным мозаичным набором хромосом не даст никакой дополнительной информации о ICM и, следовательно, не рекомендуется. Кроме того, результаты повторной биопсии не отменяют первоначальные результаты, даже если они различаются. Скорее, различные результаты будут характерны для категории эмбрионов с мозаицизмом. Повторная биопсия мозаичного эмбриона Установленный мозаицизм на эмбриональной стадии развития не всегда имеет связь с мозаицизмом, определяемом на пренатальном этапе, так как ограниченный плацентарный мозаицизм возникает тогда, когда хромосомный состав клеток плаценты, обычно выявляемый при биопсии ворсин хориона (CVS), не совпадает с таковым у плода. Это наблюдается примерно в 2% беременностей и является одной из причин, по которым последующее тестирование хромосомного набора рекомендуется осуществлять при амниоцентезе, а не при биопсии ворсин хориона.

Клинические последствия

В случаях, когда для переноса в полость матки используются мозаичные эмбрионы, наблюдается снижение частоты имплантации, при этом частота самопроизвольных прерываний беременности возрастает (по сравнению с переносом эуплоидных эмбрионов), в отличии от зарегистрированных случаев живорождения. Клинические последствия По мнению исследователей Munne & Wells (2017), «нет подробных данных, описывающих состояние [детей] после переноса мозаичных эмбрионов, но, насколько нам известно, родилось более 100 таких детей. До сих пор не было сообщений об аномальных кариотипах, хотя вполне вероятно, что немногие беременные или дети были подвержены детальной цитогенетической оценке». В течении многих лет мозаичные эмбрионы, вероятно, были перенесены несознательно, поскольку предыдущие методы при проведении ПГТ-A классифицировали эмбрионов только как эуплоидные или анеуплоидные. Поскольку некоторые мозаичные эмбрионы могут оказаться жизнеспособными, практика исключения всех эмбрионов с мозаицизмом из переноса может привести к потере эмбриона и снижению общего показателя частоты наступления беременности. Всем пациентам рекомендуется консультирование генетиков перед тем, как принять решение о переносе или исключении мозаичных эмбрионов.

Интерпретирование результатов мозаицизма

В случаях, когда нет эуплоидных эмбрионов, исследования и рекомендации предлагают расставить приоритеты среди мозаичных эмбрионов, основываясь на проценте клеток с выявленной анеуплоидией в биоптате и количества вовлеченных хромосом, как показано ниже. Приоритетность, что базируется на оценке типа хромосомного нарушения, также может быть рассмотрена, но изменение количества хромосом (моносомия против трисомии) имеет меньшее значение.
мозаицизм низкого уровняМозаицизм низкого уровня (20-40% аномальных клеток). Было показано, что эмбрионы с такими показателями чаще имеют эуплоидные ICM. Перенос таких эмбрионов с 50%-ной вероятностью приводит к наступлению нормальной беременности. Образцы с низким уровнем мозаицизма, включающим одну хромосому, могут быть приоритетными для использования в переносе , если нет эуплоидных эмбрионов.
мозаицизм высокого уровня Мозаицизм высокого уровня (>40-80% аномальных клеток). Считается, что перенос эмбрионов с мозаицизмом высокого уровня в 30% случаев приводит к наступлению нормальной беременности. Образцам с мозаицизмом высокого уровня, также как и образцам с низким уровнем мозаицизма, вовлекающим две хромосомы, может быть дан более низкий приоритет.
комплексный мозаицизмКомплексный мозаицизм (мозаицизм с вовлечением более трех хромосом ). Перенос эмбрионов, в клетках которых выявлен мозаицизм с вовлечением более трех хромосом, имеет низкую вероятность в развитии нормальной беременности, а именно коло 6 %. Эмбрионы с комплексным мозаицизмом должны относится в категорию с самым низким приоритетом.